大家好，今天来为大家解答wb一抗孵育时间这个问题的一些问题点，包括二抗孵超过一个小时会如何也一样很多人还不知道，因此呢，今天就来为大家分析分析，现在让我们一起来看看吧！如果解决了您的问题，还望您关注下本站哦，谢谢~
本文目录
一、western blot孵育一抗的时候可以同时孵育多个一抗么
理论上来说是可以的，网上也看到有网友声称自己这样做过。但是不同种一抗是否兼容不相互影响，各自应该加多少量这些条件都需要特别摸索优化。优化过程本身，包括了分别单独做每个一抗，确认在不受干扰条件下该抗体在特定样本中得到的条带究竟在什么位置，有哪些背景。
所以除非这个实验1.对楼主来说是要大量进行，重复进行的，摸清条件就可以大规模应用了；或者2.楼主样本太过珍惜，得到的量无法做足够多个western blot实验，必须在一张膜上得到尽可能多抗体的结果，否则算上优化用的精力和费用，一般不值得做。
二、western二抗孵育多久
1、根据查询二抗说明说得知，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时后，回收二抗。
2、孵育时间的设定主要是为了确保二抗能够充分地与一抗结合。孵育时间过短，会导致二抗与一抗的结合不充分，影响到后续的信号检测。
三、wb为什么不可以同时孵育2种1抗
免疫印迹实验中，如果需要在同一张膜上同时检测两种目的蛋白，一般会先上一种目的蛋白的一抗、二抗，进行ECL发光检测、压片、洗片。然后漂洗后，再上另一种目的蛋白的一抗、二抗，进行ECL发光检测、压片、洗片。这样做可以避免非特异信号的干扰，确保结果准确。
四、孵育完一抗洗多久
1、孵育完一抗后的清洗时间取决于不同的条件，包括温度、时间、以及抗体的浓度。
2、在37°C的条件下，孵育1-2小时左右后，需要在相同温度下清洗**30-60分钟**。在室温的条件下，孵育3小时左右后，需要在相同温度下清洗**30-60分钟**。在4°C的条件下，孵育18-24小时左右后，需要在相同温度下清洗**30-60分钟**。
3、如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。因此，在清洗时需要使用一次 *** PBS进行冲洗，保证切片没有相互交合。
五、一抗孵育完必须马上孵二抗吗
1、相当于延长了孵育一抗的时间，一部分二抗被多余的一抗结合浪费，由于未清洗一抗并未结合在膜上在二抗孵育清洗时也会洗掉，但是很可能会使你应该与二抗结合的一抗接触不到二抗或不均匀，造成条带不清异常，还有较强的非特异背景。
2、一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果更佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
六、一抗孵育多久
一抗孵育根据温度的不同，所需时间不同，37°C时需1-2小时，室温时需3小时，4°C时需18-24小时。
一抗指的是能够和非抗体 *** 抗原（特异 *** 抗原）特异 *** 结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。
一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37°C的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4°C的条件下，孵育18-24小时左右。
如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
1、即用型之一抗体可按照厂家提供的实验 *** 作条件进行预先实验，摸索出更佳时间。
2、浓缩型抗体一般按照厂家提供的建议稀释度进行成倍稀释预实验，以选择更佳稀释度。抗体的更佳稀释度是指：在无背景染色的情况下，获得更佳强度阳 *** 信号的抗体稀释度。一般染色背景深大多是抗体浓度过浓所致。
3、抗体孵育时的温度一般以25°C±8°C为准，在此区间内，一抗的孵育时间为30～60分钟。若温度较低应适当延长孵育时间，反之要适当减少孵育时间，或者在4°C冰箱过夜，冰箱4°C下孵育常需要注意的是：抗体孵育应在潮湿密封的环境中进行，避免抗体水分蒸发造成抗体的浓缩或干燥，致使染色背景产生。高质量的孵育盒是免疫组化的必要实验用品。
七、一抗孵育时间,不能超过多久
一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
一、一抗孵育时间，不能超过多久
一抗指的是能够和非抗体 *** 抗原（特异 *** 抗原）特异 *** 结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。
（1）一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。
（2）如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
用0.05M碳酸盐包被缓冲液（ph9.6）对抗体进行稀释，直至蛋白质含量为1-10μg/ml为止。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。第二天的时候，去掉孔内溶液，然后用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
将0.1ml经过稀释的待检样品放到反应孔中，在37℃的环境条件下孵育1小时，然后进行洗涤。
在各个反应孔中，加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体，在37℃的环境条件下，孵育0.5-1小时，然后进行洗涤。
在各个反应孔中，加入0.1mlTMB底物溶液（应当临时配制），37℃的环境条件下10-30分钟。
在各个反应孔孔中，加入0.05ml的2M *** 。
（1）在白色背景下，用肉眼进行观察即可。反应孔内颜色越深，阳 *** 程度越强，阴 *** 反应为无色或极浅。
（2）在EL *** A检测仪上，于450nm（若以A *** S显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，如果大于规定的阴 *** 对照OD值的2.1倍，即为阳 *** 。
好了，文章到这里就结束啦，如果本次分享的wb一抗孵育时间和二抗孵超过一个小时会如何问题对您有所帮助，还望关注下本站哦！
