大家好，关于一抗孵育时间过长很多朋友都还不太明白，不过没关系，因为今天小编就来为大家分享关于一抗孵育12小时够 *** 知识点，相信应该可以解决大家的一些困惑和问题，如果碰巧可以解决您的问题，还望关注下本站哦，希望对各位有所帮助！
本文目录
一、一抗孵育多久
一抗孵育根据温度的不同，所需时间不同，37°C时需1-2小时，室温时需3小时，4°C时需18-24小时。
一抗指的是能够和非抗体 *** 抗原（特异 *** 抗原）特异 *** 结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。
一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37°C的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4°C的条件下，孵育18-24小时左右。
如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
1、即用型之一抗体可按照厂家提供的实验 *** 作条件进行预先实验，摸索出更佳时间。
2、浓缩型抗体一般按照厂家提供的建议稀释度进行成倍稀释预实验，以选择更佳稀释度。抗体的更佳稀释度是指：在无背景染色的情况下，获得更佳强度阳 *** 信号的抗体稀释度。一般染色背景深大多是抗体浓度过浓所致。
3、抗体孵育时的温度一般以25°C±8°C为准，在此区间内，一抗的孵育时间为30～60分钟。若温度较低应适当延长孵育时间，反之要适当减少孵育时间，或者在4°C冰箱过夜，冰箱4°C下孵育常需要注意的是：抗体孵育应在潮湿密封的环境中进行，避免抗体水分蒸发造成抗体的浓缩或干燥，致使染色背景产生。高质量的孵育盒是免疫组化的必要实验用品。
二、一抗用多久
一抗用多久7个小时。一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。情况下，在37°C的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4°C的条件下，孵育18-24小时左右。一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
三、一抗孵育时间,不能超过多久
一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
一、一抗孵育时间，不能超过多久
一抗指的是能够和非抗体 *** 抗原（特异 *** 抗原）特异 *** 结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。
（1）一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。
（2）如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
用0.05M碳酸盐包被缓冲液（ph9.6）对抗体进行稀释，直至蛋白质含量为1-10μg/ml为止。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。第二天的时候，去掉孔内溶液，然后用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
将0.1ml经过稀释的待检样品放到反应孔中，在37℃的环境条件下孵育1小时，然后进行洗涤。
在各个反应孔中，加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体，在37℃的环境条件下，孵育0.5-1小时，然后进行洗涤。
在各个反应孔中，加入0.1mlTMB底物溶液（应当临时配制），37℃的环境条件下10-30分钟。
在各个反应孔孔中，加入0.05ml的2M *** 。
（1）在白色背景下，用肉眼进行观察即可。反应孔内颜色越深，阳 *** 程度越强，阴 *** 反应为无色或极浅。
（2）在EL *** A检测仪上，于450nm（若以A *** S显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，如果大于规定的阴 *** 对照OD值的2.1倍，即为阳 *** 。
四、elisa检测中二抗时间延长会造成什么影响
1、参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶标记的二抗。
2、吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
3、前2步洗涤是为了洗去一抗和二抗的非特异 *** 结合，洗涤的效果直接影响结果背景的深浅，所以洗涤一定要干净。洗涤液使用 TBST或者 PBST,其中的 Tween20有助于去除非特异 *** 的结合，减少背景。同时短时间多次的洗膜比长时间少次数的洗膜更有效。
4、第3步TBS洗涤是为了洗去膜上的Tween-20,因为它可以阻碍底物的沉积。
5、2)收到抗体后按要求离心后再打开管盖进行分装和保存!
6、3)对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃.
7、4)分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10 ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
8、5)复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在40℃，避免再冻起来!
9、6)绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
10、7)大部分抗体收到后40℃短暂保存1-2周对抗体活 *** 是没有影响的。
11、8)长期保存，加入叠氮纳，防止细菌污染。
12、一抗、二抗的浓度一般要参照抗体说明书选择最适当的比例，一抗二抗的选择直接影响实验结果以及背景的深浅。要严格保证反应时间，洗膜要注意尽可能地将一抗二抗洗净，有利于降低背景;还要注意一抗二抗的匹配。
13、有些抗体只能识别的表位是非连续氨基酸，这些氨基酸虽然在蛋白质一级结构中彼此不连续，但是在空间结构中则是靠在一起的。这些抗体就只能识别靶蛋白的空间结构状态。对于这些样品，缓冲液和凝胶中就不能含有SDS,并且不能够对蛋白进行加热变 *** 。
五、一抗孵育一周会怎样
1、一般情况下，在37摄氏度的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4摄氏度的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
2、一抗：可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。
六、wb一抗孵育时间
WB一抗孵育时间是指在实验室中进行Western Blot实验时，首次将抗体与蛋白质进行反应的时间。该时间决定了Western Blot实验的有效 *** 和准确 *** 。因此，掌握适当的孵育时间非常重要。
合适的WB一抗孵育时间可以更大程度地提高Western Blot实验的准确 *** 。如果孵育时间太短，抗体与目标蛋白质结合不足，无法检测到目标蛋白的表达情况。如果孵育时间过长，抗体与非特异 *** 蛋白结合过多，检测结果会出现背景噪音，影响最终的结论。
3.如何确定适当的WB一抗孵育时间
确定适当的WB一抗孵育时间需要根据具体实验情况进行调整。常见的调整 *** 有逐步增加或减少孵育时间的 *** 和利用预实验确定更佳时间的 *** 。同时，也可以参考一些相关文献中体现的孵育时间。
在进行Western Blot实验中，经常会遇到一抗孵育时间不合适导致的问题。其中，常见的问题包括检测不到目标蛋白、背景噪音过大等。解决这些问题的方案包括逐步增加或减少孵育时间、调整抗体浓度、使用合适的抗体阻断剂、优化电转移条件等。
除了 *** 作者的技巧和仪器的稳定 *** 之外，还有一些其他因素可能会影响WB一抗孵育时间的准确 *** ，如目标蛋白的表达水平、细胞类型、组织来源等。因此，在进行实验之前，需要对这些因素进行充分的了解和评估。
适当的WB一抗孵育时间对于Western Blot实验的准确 *** 和有效 *** 至关重要。在进行实验之前，需要认真评估具体情况，选择恰当的孵育时间，并进行必要的优化和调整。这样，才能真正地提升实验的质量和可信度。
七、一抗4℃孵育6小时可以吗
一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
一、一抗孵育时间，不能超过多久
一抗指的是能够和非抗体 *** 抗原（特异 *** 抗原）特异 *** 结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。
（1）一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。
（2）如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异 *** 吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特 *** 显色。
用0.05M碳酸盐包被缓冲液（ph9.6）对抗体进行稀释，直至蛋白质含量为1-10μg/ml为止。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。第二天的时候，去掉孔内溶液，然后用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
将0.1ml经过稀释的待检样品放到反应孔中，在37℃的环境条件下孵育1小时，然后进行洗涤。
在各个反应孔中，加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体，在37℃的环境条件下，孵育0.5-1小时，然后进行洗涤。
在各个反应孔中，加入0.1mlTMB底物溶液（应当临时配制），37℃的环境条件下10-30分钟。
在各个反应孔孔中，加入0.05ml的2M *** 。
（1）在白色背景下，用肉眼进行观察即可。反应孔内颜色越深，阳 *** 程度越强，阴 *** 反应为无色或极浅。
（2）在EL *** A检测仪上，于450nm（若以A *** S显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，如果大于规定的阴 *** 对照OD值的2.1倍，即为阳 *** 。
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